5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid，簡稱5-ALA)是一種廣泛存在于細菌、真菌、動物及植物等生物機體活細胞中的非蛋白氨基酸。5-ALA既可以通過生物途徑合成,也可以人工化學合成。考慮到琥珀酸酐國內(nèi)易得,價格低,以其為原料合成5-ALA時,操作比較簡單,各步收率均較高,所得產(chǎn)品質(zhì)量較穩(wěn)定,因此以琥珀酸酐作為起始原料合成5-ALA。按照該合成路線的要求,丁二酸單甲酯酰氯是其關鍵的中間體。
合成方法
S1：丁二酸單甲酯的合成
在裝有回流冷凝器的100mL單口燒瓶中加入10g丁二酸酐和5mL無水甲醇，緩慢升溫至無水甲醇回流;在丁二酸酐完全溶解后,升溫至80°C,繼續(xù)反應1h;反應完畢后,將反應混合物倒入單口燒瓶中,旋轉蒸發(fā)蒸出過量的甲醇,靜置,結晶,稱重并計算產(chǎn)率。
S2：丁二酸單甲酯酰氯的合成
在裝有電動攪拌，回流冷凝器(裝有尾氣吸收裝置)，溫度計和恒壓滴液漏斗的250mL四口瓶中加入13.2g丁二酸單甲酯,向恒壓滴液漏斗中加入8mL氯化亞砜;將反應體系升溫至50~55℃時,攪拌下滴加氯化亞砜,1h滴加完畢,再升溫至85℃,反應2h;反應完畢后,將反應物倒入單口燒瓶中,旋轉蒸發(fā)蒸出過量的氯化亞砜,在真空度為0.095MPa下,減壓蒸餾收集125℃~128℃的丁二酸單甲酯酰氯餾分，稱重并計算產(chǎn)率[1]。
應用
為了制備一種廣譜性雜環(huán)胺抗體,并建立一種可以實現(xiàn)多種雜環(huán)胺同時檢測的快速分析方法。趙秋霞等人以雜環(huán)胺2-氨基-3,4-二甲基咪唑[4,5-f]喹喔啉(MeIQx)為原料,將其與丁二酸單甲酯酰氯(MCO)反應合成雜環(huán)胺半抗原,通過活化酯法將半抗原與蛋白偶聯(lián)制備免疫原進一步制備多克隆抗體,最終建立間接競爭酶聯(lián)免疫分析方法(ic-ELISA)。該方法靈敏度(IC5o,以MeIQx計)為81.16μg/L,檢測限(IC15)為12.07μg/L。對喹啉類雜環(huán)胺(IQ、MeIQ)、喹喔啉類雜環(huán)胺(IQx、MeIQx、4,8-DiMeIQx、7,8-DiMeIQx、4,7,8-TriMeIQx)以及吡啶類雜環(huán)胺(PhIP)具有相同的識別能力,交叉反應率均達到93％以上。油炸牛肉和肉松樣品中雜環(huán)胺(MeIQx)添加回收率在91.18％~98.64％之間,檢測結果與液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)有很好的一致性(R2=0.9927)。本文建立的酶聯(lián)免疫分析方法可以實現(xiàn)喹啉類、喹喔啉類以及吡啶類雜環(huán)胺總量的檢測,為熱加工肉制品中雜環(huán)胺的檢測提供了一種簡單、準確的快速檢測方法[2]。
參考文獻
[1] 孫耀冉,牟微,常明,等. 丁二酸單酯酰氯的合成工藝研究[J]. 石家莊學院學報,2010,12(6):21-24. DOI:10.3969/j.issn.1673-1972.2010.06.004.
[2] 趙秋霞,生威,王璐璐,等. 一種檢測雜環(huán)胺類化合物的酶聯(lián)免疫檢測方法的建立[J]. 食品工業(yè)科技,2019,40(21):58-64. DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2019.21.010.