背景技術

TCEP 三羧基乙基膦是一種新型的疏基化DNA的還原劑和去保護劑。巰基化DNA末端硫原子在溶液中趨向于形成二聚體,特別是在存在氧氣的情況下。這種二聚化大大降低了一些偶聯反應實驗(如DNA在生物感應器中的固定)的效率;而在DNA溶液中加入TCEP 三羧基乙基膦,反應一段時間后除去,就可以降低DNA的二聚化。TCEP 三羧基乙基膦也常常被用于蛋白質中二硫鍵的還原,可用于阻止蛋白質中的半胱氨酸之間所形成的蛋白質分子內或分子間二硫鍵。與巰基化DNA的傳統(tǒng)還原劑和去保護劑巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT)相比,TCEP 三羧基乙基膦的穩(wěn)定性更高,不易被空氣氧化,沒有任何刺激性氣味。

合成方法^[1]

步驟一：化合物三甲基3,3',3''-膦三基三丙酸酯的合成

在機械攪拌條件下,向250ml的反應瓶中加入質量分數為80%的四羥甲基氯化磷水溶液(71.2g,0.30mol)以及乙醇(75ml),冰水冷卻并用氮氣保護,加入氫氧化鉀(16.8g,0.30mol)溶于23ml冰水的溶液,溫度略有上升;然后滴加丙烯酸乙酯(90g,0.9mol),控制溫度35-40℃,有大量固體生成,滴完保溫攪拌4小時。向反應液中倒入300ml冰水,攪拌后抽濾,用冰水洗滌濾餅,抽濾晾干得白色固體88g(即,化合物三甲基3,3',3''-膦三基三丙酸酯),收率86.6%,以供下一步反應使用。所得產物的核磁數據如下:¹HNMR(CDCl3，400MHz):δ=1.27(t,9H)，1.75(t,6H)，2.45(dt,6H)，4.15(q,6H)。

步驟二：化合物TCEP 三羧基乙基膦的合成

在機械攪拌條件下,向250ml反應瓶中加入上述反應所制備的三甲基3,3',3"-膦三基三丙酸酯(88g,0.26mol)以及摩爾濃度為12mol/L的濃鹽酸(120ml,1.44mol),攪拌升溫至80℃,固體逐漸溶解,繼續(xù)保溫反應3小時,攪拌并用冰水冷卻,析出白色固體,抽濾，濾餅用蒸餾水重結品,得白色晶體,即TCEP 三羧基乙基膦,烘干,稱重57.2g,收率76.9%。mp174-176℃。核磁數據如下:¹HNMR(D₂O，400MHz):δ=2.57(dt,6H)，2.88(dt，6H)。

參考文獻

[1] 蘇州億迪生物科技有限公司. 三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽的制備方法:CN201310173962.2[P]. 2016-06-08.