簡介

231細(xì)胞（人三陰性乳腺癌MDA-MB-231）是經(jīng)典乳腺癌體外細(xì)胞模型，具備較強(qiáng)增殖與侵襲轉(zhuǎn)移能力。該細(xì)胞常被用于天然抗腫瘤藥物藥效探究，現(xiàn)有研究證實(shí)黃芩素可抑制231細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生早期凋亡，是研究中藥單體干預(yù)三陰性乳腺癌作用機(jī)制的常用實(shí)驗(yàn)載體。

231細(xì)胞的性狀

培養(yǎng)方法

打開恒溫水浴箱，溫度設(shè)置37℃，從-80℃冰箱中取出231細(xì)胞凍存管并將其放在已經(jīng)預(yù)熱 37℃的恒溫水浴箱中（用EP手套包好防止污染），待冷凍的231細(xì)胞溶化時(shí)，用75%的酒精將手及待操作物品消毒處理，進(jìn)入超凈操作工作臺(tái)進(jìn)行操作，開啟細(xì)胞的凍存管加入新鮮培養(yǎng)液，并用移液槍把融化的231細(xì)胞液吸取到一個(gè)全新的離心管中，使用移液槍加入適量新鮮培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻。把離心管放入離心機(jī)內(nèi)，配平后速度800rpm離心3分鐘。離心后將上清液棄出，加入足量培養(yǎng)液使用移液器輕輕吹打?qū)?31細(xì)胞進(jìn)行重懸，再將細(xì)胞液移至培養(yǎng)瓶中，上下左右晃勻后標(biāo)記好231細(xì)胞名稱、實(shí)驗(yàn)者姓名和操作日期，上下左右搖勻，鏡下觀察細(xì)胞是否均勻分布，之后置于5% CO?、37℃培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)，觀察231細(xì)胞生長狀態(tài)，1-2天進(jìn)行換液，整理物品并清理工作臺(tái)。

提前將培養(yǎng)液DMEM、PBS放置于常溫環(huán)境中，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡下觀察細(xì)胞若貼壁良好（小部分漂浮細(xì)胞）則進(jìn)行換液操作。提前用紫外線燈照射消毒細(xì)胞工作臺(tái)，物品進(jìn)行酒精噴灑消毒后放入操作臺(tái)，開啟培養(yǎng)液及PBS，瓶蓋朝上放在臺(tái)面上，瓶口進(jìn)行酒精燈消毒，用移液槍將培養(yǎng)瓶中的廢液吸出棄于廢液桶內(nèi)，加入1mlPBS沖洗細(xì)胞，吸棄PBS，再加入5ml培養(yǎng)液，操作完畢將培養(yǎng)瓶重新放回5%CO?、37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，整理物品并清理工作臺(tái)，每日鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞生長至瓶底的70%-80%時(shí)，可進(jìn)行傳代[1]。

黃芩素誘導(dǎo)231細(xì)胞凋亡

黃芩素對(duì)人三陰性乳腺癌231細(xì)胞24小時(shí)抑制率的IC50為150.21μM，黃芩素濃度越高，細(xì)胞的增殖抑制率越高。曲長萍等人也通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了黃芩素呈程度依賴性抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖，隨藥物濃度增高細(xì)胞凋亡率越高，并降低癌細(xì)胞侵襲能力。為了進(jìn)一步驗(yàn)證凋亡作用，本研究采用了流式凋亡檢測實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了黃芩素對(duì)231細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用，得出100μM和150μM黃芩素處理的凋亡率分別為26.6%和30.1%，并且主要誘導(dǎo)細(xì)胞在早期凋亡。在黃芩素強(qiáng)化三氧化二砷促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究方面，周珍等人經(jīng)流式細(xì)胞學(xué)測試實(shí)驗(yàn)，黃芩素與三氧化二砷單用，都能明顯在G0/G1期因停滯而促使肝癌細(xì)胞凋亡[1]。

參考文獻(xiàn)

[1] 紀(jì)蒲家. 黃芩素對(duì)人三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的凋亡作用機(jī)制研究[D]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué), 2023. DOI:10.27213/d.cnki.glnzc.2023.000136.