研究背景

食管癌是發(fā)生于食管上皮組織的腫瘤，是世界第九大腫瘤，全球每年約有30萬人死于食管癌。食管癌主要有兩種亞型：鱗癌和腺癌。腺癌多位于遠(yuǎn)端食管,而鱗癌則可貫穿整個食管。在我們國家的食管癌發(fā)病中90%以上的組織學(xué)類型都是鱗狀細(xì)胞癌，少數(shù)則為起源于食管腺體或異位胃粘膜的腺癌。人食管鱗癌細(xì)胞是食管鱗癌種的病變細(xì)胞，將抑癌基因直接結(jié)合到DVL2和FZD1基因的啟動子區(qū)抑制Wnt/β-catenin信號通路活性可以在人食管鱗癌細(xì)胞中發(fā)揮抑癌功能^[1]。

體外培養(yǎng)及生物學(xué)性狀

實驗研究人食管鱗癌細(xì)胞的體外培養(yǎng)及生物學(xué)性狀：自原發(fā)食管鱗癌組織中獲取標(biāo)本，應(yīng)用消化培養(yǎng)法培養(yǎng)出可連續(xù)傳代的腫瘤細(xì)胞，對培養(yǎng)的細(xì)胞進行形態(tài)學(xué)觀察，免疫組織化學(xué)鑒定；MTT法測定細(xì)胞數(shù)，繪制生長曲線和計算細(xì)胞倍增時間，平板克隆實驗以測定平板克隆形成率，流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞周期分布。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，30例患者的腫瘤組織有6例成功體外培養(yǎng)出腫瘤細(xì)胞，培養(yǎng)出的細(xì)胞符合鱗癌特性；細(xì)胞生長具有平臺期，細(xì)胞倍增時間(33.12±6.10)h，平板克隆形成率(15.73±4.46)%；(77.57±6.57)%細(xì)胞處于細(xì)胞增殖的G0，G1期，少數(shù)細(xì)胞處于活躍的增殖期。故可得出結(jié)論，人食管鱗癌細(xì)胞成功獲得了體外培養(yǎng)，腫瘤細(xì)胞的增殖能力不同，只有少數(shù)細(xì)胞增殖活躍^[2]。

有關(guān)研究

為了探討小檗堿(berberine，Ber)對人食管鱗癌細(xì)胞株EC9706的生長抑制作用及其作用機制。研究人員用Ber作用E9706細(xì)胞后，采用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，用MTT法檢測不同濃度Ber在不同時間對EC9706細(xì)胞增殖的影響；采用TUNEL法和流式細(xì)胞儀Annexin-V Alexa 488/PI法檢測Ber對EC9706細(xì)胞凋亡的影響；PI染色法檢測經(jīng)Ber作用后EC9706細(xì)胞周期分布的改變；用Western blotting檢測Ber對EC9706細(xì)胞p53，c-myc，cyclin D1蛋白表達的影響；用免疫熒光方法檢測由DNA雙鏈斷裂引起的H2AX磷酸化。

結(jié)果，Ber體外能顯著抑制人食管鱗癌細(xì)胞株EC9706的生長增殖，其抑制作用與藥物濃度及作用時間呈正相關(guān)關(guān)系，作用48h EC9706細(xì)胞IC_(50)值約為50μM；Ber作用后DNA雙鏈斷裂明顯升高，G2/M期細(xì)胞比例顯著上調(diào)，但凋亡現(xiàn)象不明顯；同時實驗還發(fā)現(xiàn)Ber可以明顯上調(diào)p53的表達并抑制c-myc和cyclin D1蛋白表達。也就是說，Ber可誘發(fā)DNA損傷，并可通過細(xì)胞G2/M期阻滯而明顯抑制EC9706細(xì)胞的增殖，上調(diào)野生型p53蛋白表達以及下調(diào)原癌基因c-myc和cyclin D1蛋白表達可能是Ber抑制EC9706細(xì)胞增殖的機制^[3]。

參考文獻

[1]張翀.ZNF382抑制人食管鱗癌細(xì)胞生長與轉(zhuǎn)移的功能與機制研究[D].重慶醫(yī)科大學(xué),2018.

[2]徐馴宇,孫志剛,黃盛東,等.人食管鱗癌細(xì)胞的體外培養(yǎng)及生物學(xué)性狀[J].福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2009, 43(1):4.DOI:10.3969/j.issn.1672-4194.2009.01.003.

[3]劉巧,劉招艦,姜海燕,等.小檗堿對人食管鱗癌細(xì)胞的遺傳毒性及生長抑制作用[C]//全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會議.2009.DOI:ConferenceArticle/5aa03dafc095d722206b67db.