核酸外切酶III（Exo Ⅲ）是分子量為28 askD的單體蛋白質(zhì)，沉降系數(shù)(S20，w)為2.92并且是球形的(f/fo = 1.15)。Mol等報(bào)道了Exo Ⅲ的1.7 A高分辨率晶體結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)具有2倍對稱、4層αβ折疊結(jié)構(gòu)，與DNase Ⅰ和RNase H的結(jié)構(gòu)有相似之處。Exo Ⅲ可以催化dsDNA中幾種磷酯鍵的水解，包括3'-5'外切酶活性、3'磷酸酶活性和AP內(nèi)切酶活性。另外，還具有RNase H活性。1
作用
核酸外切酶III作用于雙鏈 DNA，沿 3′ 羥基末端方向逐步催化去除單核苷酸。每次酶與底物結(jié)合催化時(shí)，只有少量核苷酸被去除，從而在 DNA 分子群內(nèi)產(chǎn)生漸進(jìn)缺失。報(bào)告顯示，核酸外切酶 III 也有 RNase H 活性、3′ 磷酸酶活性和脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶活性。[2-3]
盡管該酶也可作用于雙鏈 DNA 的切刻以產(chǎn)生單鏈缺口，但其最適底物是平末端或 3′ 凹陷末端。 3’突出末端切割活性被抑制 抗切割程度隨突出末端的長度而變化，四堿基或更長的突出末端則幾乎完全抑制切割。
用途
定點(diǎn)突變
制備用于雙脫氧測序的單鏈 DNA
在雙鏈 DNA 中創(chuàng)造巢式缺失
參考文獻(xiàn)
[1]宋歡, 羅云波, 許文濤. 外切酶Ⅲ介導(dǎo)的功能核酸生物傳感器研究進(jìn)展. 生物技術(shù)通報(bào), 2018, 34(9): 55-69
[2]Rogers, G.S. and Weiss, B. (1980). L. Grossman and K. Moldave(Ed.), Methods Enzymol.. 65, 201-211. New York: Academic Press.
[3]Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd. Ed.). 5.84-5.85.