大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA KIT是一種基于雙抗體夾心法的定量檢測(cè)試劑盒，用于測(cè)定大鼠血清、血漿、組織勻漿等生物樣本中促紅細(xì)胞生成素（EPO）的濃度。EPO是一種由腎臟遠(yuǎn)曲小管及腎皮質(zhì)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的糖蛋白激素，其主要功能是刺激骨髓紅系細(xì)胞增殖、分化與成熟，從而調(diào)控外周血紅細(xì)胞和血紅蛋白水平。
檢測(cè)原理
大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA KIT采用經(jīng)典的雙抗體夾心法。其核心步驟如下：酶標(biāo)板上已預(yù)包被了抗大鼠EPO的抗體。當(dāng)加入樣品或標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，目標(biāo)抗原（EPO）會(huì)與這些包被抗體結(jié)合。洗滌后，加入另一種生物素化的檢測(cè)抗體，它與被捕獲的EPO結(jié)合，形成“抗體-抗原-抗體”的三明治夾心結(jié)構(gòu)。再次洗滌后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，它能與生物素特異性結(jié)合。加入底物TMB（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺），在HRP酶催化下，TMB由無(wú)色變?yōu)樗{(lán)色，最終加入終止液變?yōu)辄S色。顏色的深淺與樣本中EPO的濃度成正比。最后在450nm波長(zhǎng)下讀取吸光值（OD值），通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，即可計(jì)算出樣本中的EPO濃度。
高住低訓(xùn)模型中大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA KIT的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)價(jià)值
研究采用模擬高住低訓(xùn)大鼠模型，通過(guò)大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA KIT測(cè)定了訓(xùn)練第1、2、3、4周的血清EPO濃度[1]。結(jié)果顯示：HiLo第1周EPO水平較常氧對(duì)照組極顯著升高，第2、3周仍維持較高水平，第4周恢復(fù)至對(duì)照組水平。與此同時(shí)，血清轉(zhuǎn)鐵蛋白受體、血紅蛋白和紅細(xì)胞在第2、3周達(dá)到峰值，第4周持續(xù)升高。這一系列數(shù)據(jù)清晰地勾勒出“EPO先升后降→紅系指標(biāo)滯后攀升”的時(shí)間序列特征。本研究借助大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA KIT的高時(shí)間分辨率，得以證明急性低氧運(yùn)動(dòng)刺激首先觸發(fā)EPO分泌，EPO再通過(guò)促進(jìn)骨髓紅系祖細(xì)胞增殖，最終體現(xiàn)為外周血紅細(xì)胞和血紅蛋白的增加。如果沒(méi)有該試劑盒提供的精準(zhǔn)EPO定量結(jié)果，這種因果時(shí)序關(guān)系將難以明確。
燒傷模型中大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA KIT揭示的缺氧-貧血關(guān)聯(lián)
研究針對(duì)10%、20%、30% TBSA Ⅱ度燒傷大鼠，采用大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA KIT，利用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)定了傷后12 h、1 d、2 d、5 d、7 d的血清EPO濃度[2]。結(jié)果表明：傷后12 h EPO即顯著高于正常對(duì)照，24 h達(dá)到峰值（約為正常的4.5倍），此后逐漸下降，第7天恢復(fù)至正常水平。重要的是，EPO升高幅度與燒傷程度呈正相關(guān)，與血紅蛋白含量呈負(fù)相關(guān)。
值得注意的是，燒傷早期（12 h）血紅蛋白并未下降（血液濃縮效應(yīng)），但試劑盒已檢測(cè)到EPO顯著升高。這一發(fā)現(xiàn)提示：EPO升高并非單純由貧血驅(qū)動(dòng)，缺血、缺氧及相關(guān)體液因子（兒茶酚胺、前列腺素E等）才是更早的始動(dòng)因素。因此，大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA KIT提供的數(shù)據(jù)不僅量化了貧血程度，更提前反映了組織缺氧的真實(shí)狀態(tài)。
慢性腎功能衰竭中槲皮素干預(yù)效果的EPO評(píng)估
利用腺嘌呤誘導(dǎo)大鼠慢性腎功能衰竭（CRF）模型，采用大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA KIT測(cè)定了血漿和腎組織勻漿中的EPO含量[3]。結(jié)果顯示：腎衰對(duì)照組血漿EPO和腎組織EPO較正常組極顯著下降；而槲皮素治療組的血漿EPO和腎組織EPO均顯著回升，同時(shí)腎功能指標(biāo)（BUN、Scr）和腎組織羥脯氨酸（纖維化標(biāo)志）也明顯改善。
該研究充分體現(xiàn)了大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA KIT在組織勻漿樣本中的適用性。以往許多研究?jī)H檢測(cè)血清EPO，而該試劑盒成功應(yīng)用于腎組織勻漿，直接證明了槲皮素通過(guò)減輕腎間質(zhì)纖維化、保護(hù)EPO生成細(xì)胞（腎小管周圍毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞）來(lái)提高內(nèi)源性EPO水平。這一發(fā)現(xiàn)為中藥黃酮類化合物治療腎性貧血提供了客觀的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
參考文獻(xiàn)
[1] 李永春. 大鼠血清轉(zhuǎn)鐵蛋白受體及促紅細(xì)胞生成素水平在高住低訓(xùn)過(guò)程中的變化[J]. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù), 2007, 11(50): 10101-10104.
[2] 姚小衛(wèi). 燒傷大鼠血清促紅細(xì)胞生成素水平變化與燒傷、貧血程度的相關(guān)性[J]. 中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用, 2009,3(22):9-11.
[3] 李列平, 李雄, 彭自全, 等. 槲皮素對(duì)大鼠慢性腎功能衰竭及促紅細(xì)胞生成素水平的影響[J]. 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2004, 24(7): 412-413.