背景[1-3]
糖原PAS染色液在組織學上，主要用來檢測組織中的糖原或其他多糖物質。高碘酸是一種氧化劑，能將多糖分子中相鄰的二醇基氧化成二醛基，醛基能與希夫試劑（Schiff reagent）反應生成紅色不溶性復合物。糖原PAS染色液(細胞專用)利用真菌含有多糖，過碘酸氧化真菌壁上的多糖而暴露出醛基，醛基與無色Schiff結合呈現紅色。該染色法性能穩(wěn)定，特異性強；操作簡捷，僅需0.5h；濃度低過碘酸更適用于對真菌染色，無鹽酸乙醇分化液分化步驟。
糖原染色是病理學中常規(guī)的染色方法之一，McManus在1946年最先使用高碘酸-雪夫技術顯示黏蛋白，該法常用來顯示糖原和其他多糖，該技術不僅能顯示糖原，還能顯示中性黏液性物質和某些酸性物質以及軟骨、垂體、霉菌、真菌、色素、淀粉樣物質、基底膜等。
過碘酸(又稱高碘酸)是一種強氧化劑，它能氧化糖類及有關物質中的1，2-乙二醇基，使之變?yōu)槎?，醛與Schiff試劑能結合成一種品紅化合物，產生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細胞內其他物質，使用時應注意選擇好高碘酸濃度和氧化時間，使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過氧化，這是很關鍵的步驟。
應用[4][5]
用于減少水牛XY精子分離過程中損傷的相關研究
精子的線粒體活性、質膜完整性和凋亡間均具有相關性。利用激光光鑷拉曼光譜分析水牛精子分離、冷凍過程中蛋白質、碳水化合物和脂類等大分子物質結構和含量的變化,探討水牛分離精子的損傷機理,以便進一步優(yōu)化分離、冷凍精子程序。
研究結果發(fā)現：
(1)隨著水牛精子分離、冷凍程序的進行,對精子頭部的拉曼光譜分析可知,精子細胞內的葡萄糖(926cm-1)和蛋白質(1129、1612、1633cm-1)含量明顯提高,而脂類(1301、1661cm-1)含量明顯降低；精子中段部的拉曼光譜分析可知,脂類(1299、1445、1654cm-1)含量明顯降低,而糖原(936cm-1)和蛋白質(1125cm-1)含量明顯提高,這可能與精子細胞器的損傷有關。且四個階段精子細胞的拉曼指紋圖譜相似,僅峰值不同,從圖形上無法有效識別這四個階段的精子細胞。經優(yōu)化的PCA-DFA預測新鮮、染色后、分選后和冷凍-解凍后精子的靈敏度和特異性基本>90%。
(2)分別添加MLT、PCB和IGF-I在水牛精子分離、冷凍過程中的染色液、分離收集液和冷凍稀釋液中,與對照組相比,均能在不影響質膜完整性和細胞凋亡的同時,顯著提高冷凍-解凍后分離精子的線粒體活性(p<0.05)。
(3)分別添加MLT、PCB和IGF-I在水牛精子分離、冷凍過程中的染色液、分離收集液和冷凍稀釋液中,檢測染色后、分選后和冷凍-解凍后精子的拉曼光譜。結果表明,在冷凍稀釋液分別添加MLT、PCB和IGF-I,冷凍-解凍后的分離精子的拉曼光譜除歸屬糖原(頭部490cm-1；中段部936cm-1)和脂類(頭部1300、1661cm-1；中段部1300、1445、1655cm-1)特征峰外,其它特征峰強度明顯減弱；而在染色液、分離收集液分別添加NLT、PCB和IGF-I對染色后和分選后精子的拉曼光譜的特征峰變化不明顯。
另外,在水牛精子分離、冷凍過程各稀釋液中添加抗氧化劑組與對照組的精子細胞的拉曼指紋圖譜相似,僅峰值不同,從圖形上無法有效識別這兩組精子細胞。經優(yōu)化的PCA-DFA預測添加抗氧化劑組精子的靈敏度和特異性均>90%。
參考文獻
[1]The PCA and LDA analysis on the differential expression of proteins in breast cancer[J].Seng Liang,Manjit Singh,Saravanan Dharmaraj,Lay-Harn Gam.Disease Markers.2010(5)
[2]Use of Fluorescence Microscopy to Study Intracellular Signaling in Bacteria[J].David Kentner,Victor Sourjik.Annual Review of Microbiology.2010
[3]Quality assessment of bovine cryopreserved sperm after sexing by flow cytometry and their use in in vitro embryo production[J].Theriogenology.2010(9)
[4]Effect of semen preparation on casa motility results in cryopreserved bull spermatozoa[J].Alberto Contri,Claudio Valorz,Massimo Faustini,Laura Wegher,Augusto Carluccio.Theriogenology.2010(3)
[5]李曉霞.減少水牛XY精子分離過程中損傷的相關研究[D].廣西大學,2011.