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L-異亮氨酸的提取方法

2020/12/8 10:07:38

背景及概述[1]

異亮氨酸,學(xué)名2-氨基-3-甲基戊酸,別名異白氨酸,是20種基本氨基酸的其中一種,幾乎存在于所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)中。異亮氨酸有2個(gè)不對稱碳原子,故其存在4種立體異構(gòu)體和2個(gè)L-異亮氨酸的非對映體,但是自然界中只存在L-異亮氨酸一種類型。由于L-異亮氨酸不能在人體內(nèi)合成,所以它是人體必需氨基酸,與L-亮氨酸、L-纈氨酸統(tǒng)稱為支鏈氨基酸,因其特殊的結(jié)構(gòu)和功能,在人體生命代謝中具有重要作用。

提取[2]

1、提取方法

經(jīng)滅酶處理的L?異亮氨酸發(fā)酵液,用鹽酸調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH至3,按4%的添加量加入氯化鋁,維持絮凝溫度70℃,并攪拌120min。采用孔徑為50nm、分子量為30KD、面積為117m2的陶瓷膜對絮凝后的澄清溶液微濾,控制過陶瓷膜操作壓力為0.8Mpa,過膜溫度60℃,添加透析水量為發(fā)酵液的50%(體積比),濾液與L?異亮氨酸發(fā)酵液的濃縮比為1∶10。將濾液直接在JK008型強(qiáng)酸型陽離子樹脂上進(jìn)行吸附,上柱速度為1m/s。吸附飽和后,采用去離子水清洗樹脂雜質(zhì)。然后采用0.6N氫氧化鈉進(jìn)行洗脫,洗脫速度采用0.5m/s,收集由洗脫開始至洗脫液pH8的A洗脫液;收集由洗脫液pH8開始至洗脫液pH10.5的B洗脫液。

將所述B洗脫液再次送入離子交換吸附階段進(jìn)行下一個(gè)循環(huán)。所述A洗脫液進(jìn)入單效結(jié)晶罐濃縮,真空度≤0.92Mpa,溫度控制在80℃,當(dāng)濃縮后的A洗脫液與初始A洗脫液的體積比為1∶8時(shí),冷卻至30℃進(jìn)行放罐。將濃縮后的A洗脫液板框過濾,當(dāng)進(jìn)料壓力>0.3Mpa時(shí),停止進(jìn)料,采用0.3Mpa空氣進(jìn)行頂料直至無水滴出為止,得到濾餅。然后根據(jù)濾餅含量,按L?異亮氨酸折純4%采用去離子水進(jìn)行溶解。升溫至60℃,按0.5~2%進(jìn)行投炭。脫色時(shí)間1小時(shí),中間可分次投炭,直至粗品透光率達(dá)到>99%。

將脫色后的溶液蒸發(fā),控制蒸發(fā)溫度60℃,真空度≤0.92Mpa,當(dāng)蒸發(fā)后溶液與蒸發(fā)前溶液體積比達(dá)到1∶5時(shí)停止,放料。采用梯度降溫,12小時(shí)降至8℃,每小時(shí)降溫幅度不超過5℃,并在此溫度下育晶8小時(shí)。育晶結(jié)束后,從育晶罐放料到離心機(jī)離心,至無殘液流出為止,中間可根據(jù)料液情況適當(dāng)洗水,所得晶體為L?異亮氨酸,所得殘液根據(jù)料液質(zhì)量情況做以下處理:

當(dāng)殘液雜氨基酸含量小于4%且硫酸鹽含量小于1%時(shí),將殘液送入脫色工序,進(jìn)入下一個(gè)循環(huán);當(dāng)殘液雜氨基酸含量大于4%或硫酸鹽含量大于1%時(shí),將殘液送入濃縮工序,進(jìn)入下一個(gè)循環(huán)。

2、產(chǎn)品檢測

統(tǒng)計(jì)L?異亮氨酸產(chǎn)品的提取率,為72.4%;用高效液相色譜對產(chǎn)品進(jìn)行含量檢測,L?異亮氨酸含量為98.1%。檢測結(jié)果表明,本發(fā)明所述方法提高了L?異亮氨酸提取率,同時(shí)產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)到較高水平。

參考文獻(xiàn)

[1][中國發(fā)明]CN201711209174.9一種L-異亮氨酸結(jié)晶制備工藝

[2][中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)]CN201010557488.X一種提取L-異亮氨酸的方法

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