背景及概述[1]
舍莫瑞林是一種生長激素釋放因子(GRF)衍生物，其與相應(yīng)的未修飾的(或天然的)GRF肽序列比較有延長的體內(nèi)半衰期。除了促進(jìn)生長激素的內(nèi)源性產(chǎn)生或釋放，該類GRF衍生物可能在GRF肽“主鏈”內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)摻入氨基酸取代，或者為GRF種的變體，其中C-末端和/或N-末端通過添加一個(gè)或多個(gè)堿性殘基而被改變，或者被修飾以摻入肽化學(xué)領(lǐng)域傳統(tǒng)使用的封閉基團(tuán)類型從而保護(hù)肽末端免于體內(nèi)不需要的生化攻擊和降解。
制備[1]
步驟1：固相肽的合成以100μmol量級(jí)進(jìn)行。下列保護(hù)的氨基酸按添加到樹脂上：Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Asp(tBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-IIe-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Asp(tBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Boc-Tyr(tBu)-OH。它們?nèi)芙獾絅，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，并且根據(jù)順序，利用O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)和二異丙基乙胺(DIEA)激活。Fmoc保護(hù)基團(tuán)的移去利用20％(V/V)哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液20分鐘(步驟1)來完成。最終的氨基酸的氨基利用O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)和二異丙基乙胺(DIEA)激活的乙酸而乙?；?。
步驟2：利用85％TFA/5％TIS/5％苯硫基甲烷和5％苯酚從樹脂上切割肽，然后用干冰冷的(0-4℃)Et2O進(jìn)行沉降。粗肽收集在聚丙烯燒結(jié)的漏斗內(nèi)，干燥，并重新溶解在40％乙腈的水(0.1％TFA)混合物中，然后冷凍干燥產(chǎn)生相應(yīng)粗提物，用于純化過程中。
參考文獻(xiàn)
[1][中國發(fā)明]CN02804497.5長效生長激素釋放因子衍生物