胰蛋白酶是一種酶。 胰蛋白酶在小腸工作，它會(huì)將蛋白質(zhì)水解為肽，進(jìn)而分解為氨基酸。這是蛋白質(zhì)能被人體吸收的必要過(guò)程。這種酶的作用原理和其他絲氨酸蛋白酶差不多。 胰蛋白酶的pH值約為8，溫度約為37℃。

物化性質(zhì)

胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取，純化獲得的結(jié)晶，再制成的凍干制劑。易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑。在pH1.8時(shí)，短時(shí)間煮沸幾乎不失活；在堿溶液中加熱則變性沉淀，Ca2+有保護(hù)和激活作用，胰蛋白酶的等電點(diǎn)為pH10.1。

牛胰蛋白酶原有229個(gè)氨基酸組成，含6對(duì)二硫鍵，其氨基酸排列順序和晶體結(jié)構(gòu)已被闡明。在腸激酶活自身催化下，酶原的N末端賴(lài)氨酸與異亮氨酸殘基之間的肽鍵被水解，釋放出來(lái)纈-天-天-天-天-賴(lài)6肽，生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個(gè)，分子量23800 [2]  ，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。

豬胰蛋白酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)與牛胰蛋白酶十分相似，在氨基酸殘基排列順序中，只有41個(gè)氨基酸殘基不同，但分子構(gòu)型有很大區(qū)別。沉降系數(shù)S20W為2.77S，pI=10.8，熱穩(wěn)定性較牛胰蛋白酶穩(wěn)定，Ca2+對(duì)酶的保護(hù)作用不及牛羊的明顯，無(wú)螯合Ca2+的中心部位。有6對(duì)二硫鍵，斷裂1~2個(gè)鍵，均不至于破壞酶分子的完整結(jié)構(gòu)而保護(hù)了酶的活性。酶的活力分別相當(dāng)于牛的72%及羊的61%。

羊胰蛋白酶與牛、豬的相似，但其活力略高于牛和豬的。

胰蛋白酶專(zhuān)一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴(lài)氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶轉(zhuǎn)化為α-胰蛋白酶，再進(jìn)一步降解為擬胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而喪失。

除存在于脊椎動(dòng)物外，還存在于蠶、海盤(pán)車(chē)、蝲姑、放線(xiàn)菌等范圍廣泛的生物體中。另外與高等動(dòng)物的血液凝固和炎癥等有關(guān)的凝血酶、纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學(xué)結(jié)構(gòu)和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關(guān)系，可以認(rèn)為這些酶是從共同的祖先酶在進(jìn)化過(guò)程中分化而來(lái)的。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結(jié)構(gòu)和催化機(jī)制方面也具有密切關(guān)系，但其特異性則完全不同。

胰蛋白酶系自牛、羊或豬胰中提取的一種蛋白水解酶。中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定按干燥品計(jì)算，每1mg 的效價(jià)不得少于2500單位。 由牛、羊、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶，只斷裂賴(lài)氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。

切割位點(diǎn)

胰蛋白酶選擇地水解蛋白質(zhì)中所有的由賴(lài)氨酸Lys或精氨酸Arg的羧基所構(gòu)成的肽鍵。 如果脯氨酸Pro殘基位于切割位點(diǎn)的羧基側(cè)，則不發(fā)生切割。

細(xì)胞培養(yǎng)

胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時(shí)，胰酶溶液的作用能力最強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。

1. 稱(chēng)取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %，用電子天平準(zhǔn)確稱(chēng)取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調(diào) PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中。攪拌混勻，置于 4℃ 內(nèi)過(guò)夜。

2. 用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器（ 0.22 微米微孔濾膜）抽濾除菌。

3. 分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用