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谷胱甘肽的?生產(chǎn)方法

2022/8/5 15:18:00

谷胱甘肽是一種具有重要生理活性的三肽,即r-L-谷氨酰-L-半胱氨 酰-甘氨酸(glutathione,GSH)。半胱氨酸上的巰基為其活性基團(tuán),但巰基容易引起兩個(gè)分子谷胱甘肽的偶聯(lián),谷胱甘肽有兩種形式:還原型(GSH)和氧化型(GSSG),在生理?xiàng)l件下以還原型谷胱甘肽占絕大多數(shù),谷胱甘肽還原酶能催化兩型間的互變。

Glutathione.png

性質(zhì)與作用

谷胱甘肽的相對(duì)分子量為307. 33,熔點(diǎn)189?193°C,晶體呈無(wú)色透明長(zhǎng)柱狀,等電點(diǎn)為2. 83。它易溶于水, 可溶于稀醇、液氨,不溶于醇、醚和丙酮。它廣泛分布于動(dòng)物、植物和油料種子中。它在細(xì)胞中的功能之一就是抵御各種毒素和致癌劑。

有研究表明(孫洪剛,等.谷胱甘肽的代謝和應(yīng)用.衛(wèi)生職業(yè)教育.2004,10:1沈-127):谷胱甘肽在小腸中能被完全吸收,并且某些上皮 細(xì)胞能利用外源谷胱甘肽去毒,這說(shuō)明膳食中的谷胱甘肽決定著人體中細(xì)胞免受損傷的程度。除作為抗毒劑外,谷胱甘肽還對(duì)一些巰基酶有激活作用,可作為保護(hù)酶和其它蛋白巰基的抗氧化劑,在生物氧化、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)、保護(hù)血紅蛋白等過(guò)程中起一定作用。另外,谷胱甘肽還具有抑制衰老、預(yù)防糖尿病、消除疲勞等作用。谷胱甘肽在強(qiáng)化食品風(fēng)味的同時(shí)對(duì)人體有保健作用,它的應(yīng)用前景明顯優(yōu)于其它類(lèi)型的抗氧化劑和防腐劑。最近研究還發(fā)現(xiàn)谷胱甘 肽具有抑制艾滋病的作用。因此,研究谷胱甘肽對(duì)人類(lèi)的健康和生活具有重要的意義。

生產(chǎn)方法

一種高純度谷胱甘肽的生產(chǎn)方法,其特征在于該方法包括以下步驟:

(1)發(fā)酵液離心:將發(fā)酵水平至少達(dá)到1650mg/L的谷胱甘肽發(fā)酵液下罐后離心,離心轉(zhuǎn)速為3000?5000rpm,時(shí)間為5?lOmin,得到濕酵母細(xì)胞體;

(2)熱水破壁:將1份濕酵母細(xì)胞體加入到6?10份沸水的抽提罐中,進(jìn)行攪拌,攪拌 速為300?350rpm,當(dāng)抽提液溫度達(dá)到85?95°C時(shí),保溫10?15分鐘后,停止抽提,將 抽提液倒出,將抽提液水浴冷卻至室溫;

(3)抽提液離心:將抽提液離心,離心轉(zhuǎn)速為3000?5000rpm,時(shí)間為5?l0min,除去 酵母渣,得到含有GSH的抽提液;

(4)調(diào)節(jié)pH :在離心后的抽提液中加入酸,使料液體系處于pH 2. 5?3. 5的酸性環(huán)境 中,可沉淀某些雜質(zhì),并使GSH處于穩(wěn)定狀態(tài),防止氧化;

(5)微濾:利用0. 1?1 μ m孔徑的微濾設(shè)備對(duì)調(diào)節(jié)pH后的抽提液進(jìn)行過(guò)濾,以除去懸 浮的小顆粒雜質(zhì),得到清亮透明的濾液;

(6)陽(yáng)離子樹(shù)脂分離:將微濾后的料液在酸性環(huán)境的磺酸基團(tuán)陽(yáng)離子樹(shù)脂上進(jìn)行吸 附,使GSH被吸附,然后用氯化鈉或鹽酸溶液解析,得到富含GSH的液體;

(7)吸附樹(shù)脂分離:將經(jīng)過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂分離純化后的富含GSH的液體在苯乙烯系 弱極性大孔吸附樹(shù)脂上再次進(jìn)行吸附,然后用純水洗脫,得到純度很高的GSH液體;

(8)減壓濃縮:在-0. 07?-0. 098Mpa的真空度與55?65°C溫度下減壓濃縮GSH溶 液,使達(dá)到GSH含量在400mg/ml以上;

(9)結(jié)晶:在谷胱甘肽濃縮液中加入異丙醇或乙醇,使有機(jī)溶劑含量達(dá)到60%?80%, 調(diào)PH值至2. 90?3. 0,在0?4°C環(huán)境進(jìn)行結(jié)晶;

(10)洗晶:用體積百分比濃度為70%?90%的丙酮溶液對(duì)結(jié)晶體進(jìn)行洗滌;

(11)真空干燥:在-0. 07?-0. 098Mpa的真空度下干燥,得到98%以上純度的GSH。

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